فعالیت حشرات کش و اثرات کنترل زیستی Autogra pha californica multiplenucleopolyhedrovirus ((AcMNPV) بر لاروهای Spodoptera frugiperda

کرم ارتشی پاییزی، Spodoptera frugiperda، یکی از آفات مهم ذرت است که به تازگی به چین حمله کرده است. به منظور تعیین اثر کنترلی ویروس چندگانه هسته ای Autographa californica (AcMNPV) بر روی لارو S.frugiperda، اثر حشره کشی فعالیت و کنترل زیستی AcMN مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که میانگین غلظت کشنده (LC)₅₀از AcMNPV که بر روی 2 عمل می کند^ndلارو سن S.Frugiperda 2.9x10 بود⁷PIB/mL. میانگین اثربخشی کنترل 10⁷سوسپانسیون PIB/mL AcMNPV+Bt (1500 میلی‌لیتر در هر ساعت²) در S.frugiperda 68.99% در 10 بود^هفتمروز و 66.87 درصد در 15^هفتمیک روز پس از تجویز. در نهایت، از نرم افزار DNAMAN 6.0 برای شناسایی همولوژی DNA حشرات مرده استفاده شد و نتایج نشان داد که توالی های ژن polh، lef-8 و lef-9 حشره مرده و S．Frugiperda 100% یکسان بودند. همه نتایج فوق می تواند نقش کلیدی بیشتری در کنترل داشته باشد. S．Frugiperda ．پیشنهاد می شود که 10⁷PIB/mL AcMNPV＋Btسوسپانسیون (1500 میلی لیتر در هر ساعت²باید در اوج وقوع لاروهای جوان S.frugiperda و بعد از 16 الی 17 در روز آفتابی استفاده شود تا از تأثیر دما و نور بالا جلوگیری شود تا تهیه ویروس نقش بهتری داشته باشد و اثر کنترلی آن را بر S.frugiperda بهبود بخشد.

AcMNPV; Spodoptera frugiperda; لپیدوپتران آفت؛ لارو؛ آفت کش های زیستی؛AcMNPV＋تعلیق Bt; فعالیت حشره کش؛ پیشگیری و کنترل سبز

Spodoptera frugiperda یک آفت مهاجر همه چیز خوار است که برای اولین بار در سال 2019 از میانمار وارد چین شد و به سرعت به 1518 منطقه در 26 استان و شهرداری چین گسترش یافته است و تهدیدی جدی برای امنیت غذایی چین به شمار می رود. تاکنون، در استراتژی کنترل کرم ارتشی، استفاده از کرم های شیمیایی همچنان به دفع شدید کرم های شیمیایی وابسته است. استفاده بیش از حد از آفت کش های شیمیایی به راحتی می تواند باعث مقاومت در برابر آفات، افزایش مجدد و باقی مانده های محیطی و آلودگی شود. مجموعه ای از مشکلات جدی به طور جدی توسعه پایدار کشاورزی مدرن را محدود کرده است. بنابراین، استفاده از روش های کنترل بیولوژیکی یا جایگزینی آفت کش های زیستی. استفاده از آفت کش ها برای کنترل Armyworm روز به روز اهمیت بیشتری پیدا می کند و توجه روزافزونی را به خود جلب کرده است.

Autographa californica چند هسته ای چند وجهی AcMNPV یک ویروس چند دانه ای جاسازی شده هسته ای است که از لارو یونجه Argyria جدا شده است. این ویروس می تواند بیش از 30 نوع آفات لپیدوپتر مانند پروانه چغندر، پروانه کلم، مخلوط آرژیری و کلم را آلوده کند. سایر حشره‌کش‌ها و ویروس‌های آفات غیر هدف به عنوان سینرژیست، اثر هم افزایی آشکاری بر بسیاری از آفات Noctuidae دارند و طیف حشره‌کشی را بیشتر گسترش می‌دهند و اثر حشره‌کشی را بهبود می‌بخشند. AcMNPV یک آفت کش جدید از ویروس حشرات است که توسط شرکت فناوری بیولوژیکی ووهان Unioasis، با مسئولیت محدود ساخته شده است. این ترکیبی از ویروس پلی‌هدروز هسته‌ای Argyria یونجه و سینرژیست قوی ویروس Bt است. با فعالیت حشره کش خوب، A به طور گسترده در سبزیجات، درختان میوه، برنج و سایر زمینه ها استفاده شده است. در این مقاله، فعالیت حشره‌کشی و اثر کنترل زیستی ویروس چندگانه هسته‌ای Autographa californica (AcMNPV) در برابر Spodoptera frugiperda شناسایی و با استفاده از سنجش فعالیت آزمایشگاهی و آزمایش مزرعه‌ای، به منظور ارائه پشتیبانی از داده‌ها برای کاربرد گسترده ویروس چند وجهی هسته‌ای در کنترل بیولوژیکی Spodoptera frugiperda مورد ارزیابی قرار گرفت. این مبنای نظری برای ثبت و استفاده از عامل تعلیق AcMNPV به علاوه Bt در کنترل Armyworm فراهم می کند.

ویروس آزمایش‌شده Autographa californica چند نوکلئوپلی‌هدروویروس (AcMNPV) بود. در 20 مه 2019، Spodoptera frugiperda از مزرعه ذرت در شهر Xiantao، استان هوبی جمع‌آوری شد و آزمایش غربالگری عفونت ویروس در آزمایشگاه Wuhan Technology Co., LTD انجام شد. (که در آن Autographa Californica Multinucleopolyhedrovirus AcMNPV دارای فعالیت عفونی بالایی در برابر Spodoptera frugiperda است)، لاروهای Spodoptera frugiperda برای افزایش و تکثیر پرورش داده شدند. لاروهای مرده آلوده به ویروس با آب آسیاب شده و از طریق 3 لایه filtratee فیلتر شده و در 6 لایه filtratee فیلتر شد. و 300r/min. میکرو شمارش 1.8 *10 بود¹⁰چند وجهی بدخیم در هر میلی لیتر (Polyhedralinclusionbody PIB)، یعنی برای بدست آوردن درجه فنی خالص ویروس چند وجهی (1.8 x 10)¹⁰PIB/mL)، در دمای پایین نگهداری شده و کنار گذاشته شود.

عامل بیولوژیکی مورد آزمایش Autographa california چند وجهی هسته ای بود. Bacillus thuringiensis برای کوتاه AcNPV.Bt (1.0 * 107 PIB/mL). این توسط Wuhan Unioasis Bilogical Technology Co., LTD توسعه یافته و توسط شرکت تابعه آن Wuhan Chuqiang Biological Technology Co., LTD تولید شده است.

حشره آزمایشی Spodoptera frugiperda بود. در 20 ژوئیه 2019، لارو Spodoptera frugiperda از مزرعه ذرت تابستانی در روستای Banqiao، شهر Dachangzhen، شهرستان Tongshan، استان هوبئی جمع‌آوری شد و به آزمایشگاه موسسه تحقیقات گیاهی حفاظت از خاک و کود در آکادمی علوم کشاورزی هوبی با برگ‌های منفرد منتقل شد. ظروف پتری پلاستیکی (قطر 8 سانتی متر، ارتفاع 3 سانتی متر). شرایط تغذیه داخلی: (1±25) ℃ و رطوبت نسبی 60٪ - 70٪، دوره نوری 16L: 8D است. پس از چندین نسل از تولید مثل، بلوک های تخم مرغ تازه و استریل شده برای استفاده نگهداری می شوند.

شش گرادیان غلظت، 1.0 * 10⁹1.0 *10⁸1.0 *10⁷1.0 *10⁶، 1.0 *10⁵، 1.0 * 10⁴در این آزمایش طراحی شد. ابتدا TC AcNPV به 10*1.0 رقیق شد.⁹PIB/ml رقیق شد و سپس 10 بار رقیق شد تا رقیق‌کننده‌های دیگری با غلظت‌های مختلف به‌دست آید.

روش تغذیه بخش برگ اتخاذ شد، یعنی برگهای جوان ذرت تازه (طول 2 سانتی متر * عرض 2 سانتی متر) ابتدا با اسپری سوسپانسیون ویروس تیمار شدند، سپس لاروها تغذیه شدند و تک سر در پتری دیش ها تغذیه شدند. نوارهای تغذیه عبارت بودند از: درجه حرارت (25±1) درجه سانتیگراد، فاز تا رطوبت (60% ~ 70%)، دوره نوری (16L:8D). از تکثیر ویروس در سلول‌ها و میزبان‌های خانواده شب پره‌ها، تعداد حشرات مرده ناشی از ویروس و تعداد کل حشرات مرده در روزهای 7 و 10 پس از آلودگی بررسی شد و میزان تلفات محاسبه و LC50 محاسبه شد.

آزمایش کارایی مزرعه در مزرعه ذرت تابستانی روستای Xiaoyuan، شهر Chuangwang، شهرستان Tongshan، استان هوبی انجام شد. قطعه آزمایشی در مجموع 1500 متر است²نوع خاک خاک کلسیکی است، مقدار pH آن 6.8، محتوای مواد آلی 13.9 درصد و حاصلخیزی متوسط ​​تا زیاد است. ذرت در تمام طول سال کاشته می شود و رقم ذرت Xiyu شماره 3 است.²به عنوان کود پایه اعمال می شود و کاشته می شود. از سال 2019، یک وقوع جدی کرم ارتشی پاییزی در این زمینه وجود داشته است.

در مجموع 10 میلیون سوسپانسیون AcMNPV.BT (1500 میلی لیتر در هر ساعت)²) و 15% بنزوات امامکتین. سوسپانسیون ایندوکارب (300 میلی لیتر بر ساعت)²حشره کش معمولی و شاهد بلانک با 3 تیمار تیمار شدند. هر تیمار 4 بار، با مجموع 12 کرت آزمایشی، که هر کدام مساحت 100 متر را پوشش می‌داد، تکرار شد.²

در بعد از ظهر روز 26 آگوست 2020 (زمانی که لاروهای Spodoptera frugiperda به طور مکرر رخ می دهند)، یک بار در شب سمپاشی آفت کش را انجام دهید. اسپری برقی کوله پشتی چند منظوره برند لبنان 3WBJ-16DZ با فشار کاری 0.40 ~ 0.60 مگاپاسکال، قطر دهانه 1 میلی متر و سرعت جریان 60 تا 85 لیتر در ساعت استفاده می شود. روز مصرف سموم آفتابی با دمای 23-32 درجه سانتیگراد است. نظرسنجی را در روزهای 1، 3، 5، 7، 10 و 15 پس از درخواست انجام دهید. در طول بررسی، از هر کرت 10 نقطه نمونه برداری تصادفی گرفته شد و در هر نقطه 10 بوته که در مجموع 100 بوته بودند به طور مستمر بررسی شدند. تعداد حشرات زنده، مرگ و میر، مسمومیت و دشمنان طبیعی در هر بوته ذرت ثبت شد. فرمول محاسبه مربوطه به شرح زیر است؛

کاهش میزان حشره =(تعداد حشرات زنده قبل از کاربرد - تعداد حشرات زنده بعد از کاربرد)/تعداد حشرات زنده قبل از کاربرد

اثر پیشگیری و کنترل=( کاهش میزان حشره در منطقه درمان- کاهش میزان حشره در منطقه شاهد)/(100- کاهش میزان حشره در منطقه شاهد)*100%

1) نمونه های ویروس را آزمایش کنید. مشروب مادر ACMNPV را برای تعیین فعالیت در داخل ساختمان (نمونه 1)، آماده سازی بیولوژیکی 10 میلیون ACMNPV.Bt SC (نمونه 2)، اجساد حشرات آلوده به ویروس پس از آزمایش اثربخشی میدانی (نمونه 3) و لاروهای نسل دوم کرم ارتشی (نمونه آزمایشی 4 نمونه آلوده به ویروس 3 نمونه جمع آوری شده در حشره) انتخاب کنید. برای بررسی اینکه آیا AcMNPV در 10 میلیون ACMNPV.Bt دارای فعالیت ضد باکتریایی در برابر لاروهای کرم ارتشی پاییزی است یا خیر.

2) استخراج DNA 1.0 میلی لیتر از نمونه AcMNPV را بردارید، 99.0 میلی لیتر آب مقطر اضافه کنید و به مدت 1 دقیقه کاملاً نوسان کنید. پس از نوسان 300 میکرولیتر سوسپانسیون بگیرید، 100 میکرولیتر محلول ترک قلیایی، حمام آب در دمای 37 درجه سانتیگراد به مدت 30 دقیقه اضافه کنید. 200μL بافر Tris·HCl اضافه کنید و با سرعت 10000 r/min به مدت 8 دقیقه سانتریفیوژ کنید. مایع رویی را در یک لوله سانتریفیوژ قرار دهید، 5 میکرولیتر پروتئاز K و 60 میکرولیتر SDS اضافه کنید، حمام آب در دمای 65 درجه سانتیگراد به مدت 2 ساعت اضافه کنید، خارج کرده و تا دمای اتاق خنک کنید. 650 میکرولیتر فنل اشباع L Tris را به خوبی مخلوط کنید، با سرعت 10000 r/min به مدت 5 دقیقه سانتریفیوژ کنید و مایع رویی را در یک لوله سانتریفیوژ جدید قرار دهید. 650 میکرولیتر مایع مخلوط فنل و کلروفرم (نسبت حجمی 1:1) را اضافه کنید، به مدت 5 دقیقه با سرعت 10000 r/min سانتریفیوژ کنید و سپس مایع رویی را در یک لوله سانتریفیوژ جدید قرار دهید. 650 میکرولیتر مایع مخلوط کلروفرم و ایزوآمیل الکل (نسبت حجمی 24:1) را اضافه کنید، به مدت 5 دقیقه با سرعت 10000 r/min سانتریفیوژ کنید و در نهایت مایع رویی را در یک لوله سانتریفیوژ جدید قرار دهید. غلظت DNA را با استفاده از اسپکتروفتومتر اندازه گیری کنید.

3) تقویت PCR. با استفاده از سیستم استاندارد T3 super mix: نمونه DNA 2 μL. پرایمرهای 0.5μL برای قبل و بعد، T3 super mix 18μL و ddH2O7μL. شرایط تقویت PCR 95 ℃ است. پس از 3 دقیقه قبل از دناتوراسیون، چرخه های زیر انجام می شود: 98 ℃ برای 15 ثانیه، 52 ℃ برای 20 ثانیه، 72 ℃ برای 20 ثانیه، و در نهایت 72 ℃ به مدت 5 دقیقه، در مجموع 42 بار چرخه.

4) الکتروفورز ژل DNA آگارز. محصول تکثیر PCR 2μL و نشانگر DNA 5 کیلوبایتی را بردارید و در ژل آگارز قرار دهید و در ولتاژ 180 ولت به مدت 20 دقیقه الکتروفورز کنید. پس از الکتروفورز، محصولات PCR را در سیستم تصویربرداری ژل مشاهده کنید.

پرایمر بالادست Polh:

AGGGTTTCCCAGTCACGGGCTGAG-GATCCTTT

پرایمر پایین دست Polh:

GAGCGGATAATTTCACACTGGTGTGTG-CAAACTCCTT

پرایمر بالادست Lef-8:

AGGGTTTCCCAGTCCACGCACGGGAAAT-GAC

آغازگرهای پایین دست Lef-8:

GAGCGGATAATTTCACATTGTACGGATCTTTCGGC

پرایمرهای بالادست Lef-9

AGGGTTTCCCAGTCACGAAACGGGTACGCGG

آغازگرهای پایین دست Lef-9:

GAGCGGATAATTTCACATTGTCACCGTCAGTC

در نهایت، از نرم افزار DNAMAN6.0 برای مقایسه توالی های اندازه گیری شده polh، lef-8 و lef-9 استفاده کنید.

داده های تجربی با استفاده از نرم افزار تجزیه و تحلیل آماری داده های IBM SPSS 22.0 پردازش شدند.

در آزمایش تعیین فعالیت حشره کش ویروس، تعداد حشرات مرده و زنده تحت درمان با هر غلظت شمارش می شود و میزان مرگ و میر و درصد مرده تنظیم شده محاسبه می شود و به مقادیر احتمال تبدیل می شود. غلظت هر تیمار به مقادیر lg تبدیل می شود. معادله رگرسیون حدت (شیب ± SE) از طریق مقادیر و وزن‌های احتمال کار و LC محاسبه می‌شود.₅₀مقدار و حد اطمینان 95٪ آن، و در نهایت آزمایش کای اسکوئر (²). در آزمایش اثر کنترل مزرعه، تعداد حشرات زنده در هر تیمار شمارش و میزان کاهش آفت محاسبه شد. اثر کنترل با استفاده از فرمول ویرایش مایکروسافت اکسل محاسبه شد. برای تجزیه و تحلیل از روش دانکن و برای مقایسه تفاوت معنی دار بین تیمارها از آنالیز واریانس یک طرفه استفاده شد.

نمودارهای موجود در متن همگی با استفاده از نرم افزار Microsoft Excel ایجاد شده اند.

نتایج آزمایش فعالیت داخل ساختمان (جدول 1) نشان می دهد که پس از 7 روز درمان، LC₅₀اثر AcMNPV روی لاروهای سن دوم Spodoptera frugiperda 10×4.1 است.⁷PIB/ml و LC₉₀1.05x10 است⁸PIB/ml پس از 10 روز درمان، LC₅₀مقدار AcMNPV روی لاروهای سن دوم 2.9x10 است⁷PIB/ml و LC₉₀7.8x10 است⁷PIB/ml ال سی₅₀و ال سی₉₀اثرات AcMNPV روی لاروهای سن دوم کرم ارتشی پاییزی پس از 7 روز درمان، هر دو بیشتر از 10 روز بود، که نشان می‌دهد AcMNPV فعالیت حشره‌کش خوبی را در برابر لارو Spodoptera frugiperda در 7 روز از خود نشان داد.

نتایج کارآزمایی های میدانی نشان داد که 10 میلیون AcMNPV. Bt SC (1500 mL/hm²) اثر نسبتاً کندی بر روی لاروهای spodoptera frugiperda داشت. میانگین اثر کنترل در روز اول، سوم و پنجم پس از سمپاشی به ترتیب 57/11، 23/16 و 56/15 درصد بود. میانگین اثر کنترل در روز هفتم پس از سمپاشی تنها 21.88 درصد بود. اما در روز دهم پس از سمپاشی، اثر کنترل حشره به طور ناگهانی به 68.99 درصد افزایش یافت و میانگین اثر کنترل در روز 15 پس از سمپاشی نیز 66.87 درصد بود. با این حال، در مقایسه با عوامل شیمیایی Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% (300ml/hm²، اثر کشنده خوبی بر روی لاروهای spodoptera frugiperda داشت که می تواند به سرعت تعداد جمعیت حشرات را کاهش دهد. میانگین اثر کنترل در روز اول، سوم، پنجم و هفتم پس از مصرف دارو به ترتیب 91.39، 92.66، 90.71 و 87.19 درصد بود. با این حال، میانگین اثر کنترل در روز دهم شروع به کاهش کرد و تنها به 67.63 درصد رسید و میانگین اثر کنترل در روز پانزدهم به 51.60 درصد کاهش یافت. برای جزئیات به جدول 2 مراجعه کنید.

در عین حال، ما همچنین دریافتیم که میزان کاهش حشره در منطقه شاهد در روزهای اول، سوم و پنجم پس از تیمار منفی بود که نشان دهنده افزایش تعداد حشرات است. در روز هفتم پس از درمان، شروع به مثبت شدن کرد (جمعیت حشرات شروع به کاهش کرد). میانگین کاهش حشره در روزهای دهم و پانزدهم به ترتیب 25/38 و 00/47 درصد بود که به احتمال زیاد به این موضوع مربوط می شود که برخی از لاروهای اسپودوپترا فروگیپردا در خاک شروع به شفیره شدن کردند و نسل ها پس از 15-10 روز همپوشانی کردند.

به طور خلاصه می توان مشاهده کرد که 10 میلیون AcMNPV. Bt SC (1500 mL/hm²) روی اسپودوپترا فروگیپردا اثر کنترلی خاصی دارد ولی اثر آن کند است و اثر آن حدود 15-10 روز پس از مصرف است.

در طی آزمایشات میدانی، اثرات 10 میلیون AcMNPV. تعلیق Bt بر روی دشمنان طبیعی آفات ذرت مانند عنکبوت، کفشدوزک و سوسک نیز مورد بررسی قرار گرفت. نتایج نشان داد که 10 میلیون AcMNPV. سوسپانسیون Bt با میانگین 13.4 دشمن طبیعی در هر 100 گیاه، آسیب قابل توجهی به دشمنان طبیعی مانند عنکبوت، کفشدوزک و سوسک وارد نکرد. با این حال، سوسپانسیون Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% اثر سمی قابل توجهی بر روی دشمنان طبیعی مانند عنکبوت ها، کفشدوزک ها و سوسک ها داشت. در روز اول پس از تیمار، میانگین تعداد دشمنان طبیعی روی 100 بوته ذرت تنها 3.1 بود و در روز سوم پس از تیمار، تنها 5.2 دشمن طبیعی از انواع مختلف یافت شد (شکل 1). می توان دید که 10 میلیون AcMNPV. سوسپانسیون Bt اثر محافظتی خوبی بر روی دشمنان طبیعی آفات دارد، در حالی که سوسپانسیون Emamectin Benzoate+ Indoxair Conditioningarb 15% آسیب نسبتاً بیشتری به دشمنان طبیعی وارد می کند.

نتایج تکثیر PCR نمونه‌های آزمایشی مختلف نشان داد که قطعات تقویتی polh، lef-8 و lef-9 نمونه‌های 1، 2، 3 و 4 از نظر اندازه ثابت و صحیح هستند. محصولات PCR ژن های polh، lef-8 و lef-9 به ترتیب 0.54، 0.716 و 0.29 kb بود (شکل 2)، که ثابت می کند AcMNPV دارای فعالیت حشره کشی در برابر لارو spodoptera frugiperda است.

در نهایت از نرم افزار DNAMAN 6.0 برای انجام همترازی توالی بر روی قطعات تقویت شده polh، lef-8 و le.f-9 در نمونه های 1، 2، 3 و 4 استفاده شد (شکل 3). نتایج نشان داد که شباهت بین توالی های تقویت شده polh، lef-8 و lef-9 در نمونه های 1، 2، 3 و 4 100 درصد بود که نشان می دهد نمونه های 1، 2، 3 و 4 همگی از یک ویروس AcMNPV منشا می گیرند.

AcMNPV یک ویروس میله ای شکل حشره است که از طریق تغذیه بدن حشرات را آلوده می کند. این ویروس تکثیر می شود و در سراسر بدن حشره پخش می شود و به تدریج کل بدن را آلوده می کند و در نهایت منجر به مرگ می شود. نتایج این مطالعه نشان می دهد که AcMNPV فعالیت بیولوژیکی خوبی در برابر لاروهای Spodoptera frugiperda دارد. LC آن در روز هفتم و دهم به ترتیب 4.1x107 و 2.9x107PIB/m بود و اثرات کنترل خوبی را در میدان نشان داد. سوسپانسیون مختلط 10 میلیون AcMNPV.Bt (1500 میلی لیتر در هر ساعت²در روزهای دهم و پانزدهم پس از درمان به ترتیب به 99/68 و 87/66 درصد کنترل متوسط ​​خوبی داشت و برای دشمنان طبیعی بی خطر بود. بنابراین سرعت تحقیق و توسعه باید تسریع شود تا AcMNPV بتواند نقش بیشتری در کنترل بیولوژیکی Spodoptera frugiperda ایفا کند. سوسپانسیون 10 میلیونی AcMNPV.Bt تولید شده توسط شرکت بیوتکنولوژی Wuhan Chuqiang، ترکیبی از AcMNPV و آفت‌کش زیستی Bacillus thuringiensis (Bt) است که می‌تواند به طور قابل توجهی فعالیت حشره‌کشی ویروس را بهبود بخشد. از آنجا که Bt یک حشره کش با طیف وسیع با فعالیت حشره کش میکروبی خوب است، هنگامی که AcMNPV با Bt ترکیب می شود، سمیت آن باید به طور قابل توجهی در مقایسه با یک فرمول منفرد بهبود یابد. این نه تنها دامنه حشره کش Bt را گسترش می دهد، بلکه سمیت آن را نیز افزایش می دهد و به هدف استفاده از یک فرمول واحد برای کنترل آفات متعدد دست می یابد. به همین دلیل است که تعلیق 10 میلیون AcMNPV.Bt می تواند به طور گسترده در سبزیجات، درختان میوه و برنج ترویج شود. بنابراین، 10 میلیون AcMNPV.Bt می تواند به عنوان یک عامل کنترل سبز برای Spodoptera frugiperda در ذرت تبلیغ شود.

در این مطالعه، هنگام انجام آزمایش‌های کارآمدی صحرایی، در صورت کاهش سریع جمعیت حشرات در منطقه شاهد (میزان کاهش حشره در روز پانزدهم به 00/47 درصد رسید)، میانگین اثر کنترلی سوسپانسیون 10 میلیونی AcMNPV.Bt (1500 میلی‌لیتر در هر ساعت)²) در روز پانزدهم پس از درمان 66.87 درصد بود که روند صعودی سریعی را نشان می دهد. در حالی که میانگین اثر کنترلی آفت کش شیمیایی 15% متوکسازول · indefencarb SC (300 میلی لیتر در هر ساعت)²) در روز پانزدهم پس از درمان به 60/51 درصد کاهش یافت. اگرچه می توان مشاهده کرد که تعلیق 10 میلیونی AcMNPV.Bt (1500 میلی لیتر در هر ساعت)²) دارای اثر کنترلی مشخصی بر روی Spodoptera frugiperda در روز 10 تا 15 است، با توجه به اثر آهسته آفت کش های بیولوژیکی و طول عمر کوتاه و همپوشانی نسل لارو Spodoptera frugiperda، توصیه می شود در هنگام انجام آزمایش های آزمایشی مزرعه ای با اثربخشی ویروسی ایده آل (بیشخصی) افزایش تعداد بررسی ها و افزایش زمان تحقیق افزایش یابد. نتایج این نیز از محدودیت های این مطالعه است. به طور خلاصه، در مقایسه با عوامل بیولوژیکی، عوامل شیمیایی اثر کشنده نسبتاً بالاتری بر آفات دارند و به سرعت اثر می‌گذارند. آنها می توانند به عنوان یک اقدام پیشگیری و کنترل اضطراری در هنگام شیوع آفات مورد استفاده قرار گیرند. هنگامی که آسیب آفات نسبتاً خفیف باشد، آفت‌کش‌های بیولوژیکی می‌توانند جایگزین آفت‌کش‌های شیمیایی به عنوان یکی از اقدامات پیشگیری و کنترل سبز شوند، در نتیجه آلودگی محیط‌زیست را کاهش داده و به اثر حفاظت از اکولوژی کشاورزی دست می‌یابند.

علاوه بر این، ژن Polh (polyhedrin) مورد استفاده در این مطالعه یک نوع پروموتر پروتئین چند وجهی است، آن و P10 رایج ترین پروموتر مورد استفاده در سیستم ناقل بیان باکولوویروس (BEVS) هستند که هر دو در مرحله آخر عفونت ویروسی به شدت بیان می شوند.^[13]. با این حال، فعالیت پروموتر p10 کمتر از پروموتر polh است، بنابراین پروموتر polh اغلب برای بیان پروتئین های اگزوژن استفاده می شود. ژن lef-8 می تواند بزرگترین زیرواحد RNA پلیمراز خود ویروس را رمزگذاری کند و نوعی فاکتور بیان دیررس است.^[14]. lef-9 نوعی فاکتور بیان دیررس است که زیرواحد کمپلکس پروتئین را با lef-4، lef-8 و p47 در باکولوویروس‌ها کد می‌کند. تحقیقات نشان داده است که ویروس‌های فاقد ژن lef-9 نمی‌توانند ذرات ویروس را با فعالیت عفونی تولید کنند، در حالی که ویروس‌های دارای ژن lef-9 می‌توانند با بازگرداندن آن، فعالیت عفونی ویروس را بازیابی کنند. بنابراین، ژن lef-9 یک ژن ضروری برای باکولوویروس برای تشکیل BV (ویروس جوانه‌دار) با فعالیت عفونی است.^[15]. مشاهده می‌شود که ژن‌های lef-8 و lef-9 محافظه کاری بالایی در انواع مختلف ویروس‌های چند وجهی هسته‌ای دارند، بنابراین ژن‌های lef-8 و lef-9 را می‌توان مبنایی برای شناسایی انواع ویروس قرار داد. بنابراین، این مطالعه از polh، lef-8 و lef-9 به عنوان اشیاء تشخیص استفاده کرد و از طریق همترازی توالی ژن، همسانی بالا بود و همگی به 100٪ رسید. روش تشخیص مولکولی سریع بار دیگر تأیید کرد که AcMNPV دارای فعالیت حشره‌کش خوبی در برابر Spodoptera frugiperda است که برای ترویج و کاربرد بیشتر در پیشگیری و کنترل Spodoptera frugiperda مناسب است.

از سال 2019، Spodoptera frugiperda به چین حمله کرده و به یک آفت مهم ذرت تبدیل شده است. جمعیتی مستقر در برخی از مناطق جنوب و جنوب غربی چین تشکیل داده است که خسارات زیادی به صنعت ذرت چین وارد کرده و امنیت غذایی چین را به طور جدی تهدید می کند.^[16]. در مواجهه با وضعیت شدید پیشگیری و کنترل فعلی Spodoptera frugiperda در چین، تسریع غربالگری و توسعه آفت‌کش‌های کارآمد برای پیشگیری و کنترل Spodoptera frugiperda ضروری است.^[17]. اگرچه حشره‌کش‌های ویروسی به دلیل سرعت عمل کند و طیف حشره‌کش باریک، کاربرد گسترده خود را محدود کرده‌اند، در زمینه توجه روزافزون به اکولوژی و حفاظت از محیط‌زیست، انتظار می‌رود حشره‌کش‌های باکولوویروس به دلیل مزایای قابل توجهی که نسبت به آفت‌کش‌های سنتی دارند، به طور فزاینده‌ای در تولیدات کشاورزی مورد استفاده قرار گیرند. با توجه به حساسیت آماده سازی ویروس حشرات به شرایط خارجی مانند درجه حرارت بالا، نور خورشید، باران و سن آفات [18]. بنابراین توصیه می شود در دوره اوج بروز لارو آفات از سموم دفع آفات استفاده شود. بهتر است بعد از ساعت 16 الی 17 در روزهای آفتابی استفاده شود تا از تأثیر شرایط نامساعد محیطی مانند دما و نور زیاد جلوگیری شود تا فرمولاسیون ویروس نقش خود را بهتر ایفا کند و اثر کنترلی بر آفات را بهبود بخشد.